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      SCFA ELISA檢測(cè)試劑盒操作方法(裸鼠)

      發(fā)布時(shí)間:2018-12-26   點(diǎn)擊次數(shù):2227次

      SCFA ELISA檢測(cè)試劑盒操作方法(裸鼠)

      實(shí)驗(yàn)原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被裸鼠短鏈脂肪酸(SCFA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的裸鼠短鏈脂肪酸(SCFA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

      操作步驟

      1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
      2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
      3.   樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
      4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
      5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
      6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

        每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

      劑盒性能

      •  檢測(cè)范圍:20 μmol/L – 640 μmol/L。
      •  靈敏度:低檢測(cè)濃度小于1.0 μmol/L。
      •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
      •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

       

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